豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒
說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒
英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To
Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA
【規(guī)格】
96 T×2
【預(yù)期用途】
本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體，可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗免疫狀況分析。
【檢驗原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體"復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要成份】
1 | 抗原包被板 | 96 T×2 |
2 | 酶標記物 | 22 ml |
3 | 樣本-稀釋液 | 50 ml |
4 | 陰性對照血清 | 1.5 ml |
5 | 陽性對照血清 | 1.5 ml |
6 | 顯色劑 | 12 ml×2 |
7 | 終止液 | 12 ml |
8 | 10×濃縮洗滌液 | 50 ml |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
10 | 說明書 | 1份 |
【自備器材】
1．酶標儀，雙波長450/630 nm濾光片
2．微量移液器（單道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．一次性槍頭（10 μl，200 μl）
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2 ℃－8 ℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在－20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的血清樣本。
【實驗準備】
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30 min，可以獲得最-佳結(jié)果。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本-稀釋液將樣本作40倍稀釋 （例:將5 μl樣本加至195 μl樣本-稀釋液中）。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋10倍（例：將10 ml洗滌液加入90 ml去離子水中）。若10倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37 ℃至溶解后即可。
【檢驗方法】
1. 加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100 μl于相應(yīng)孔中（可不設(shè)空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100 μl用樣本-稀釋液稀釋好的樣本。
2. 溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
3. 洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10 s，直接甩出，洗滌3次，最-后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。
4. 加酶：每孔加酶標記物100 μl。
5. 溫育：加好酶標記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
6. 洗板：同步驟3。
7. 顯色：每孔加顯色劑100 μl，振蕩混勻，37 ℃避光反應(yīng)10 min。
8. 終止：每孔加終止液50 μl，振蕩10 s，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9. 讀數(shù)：以450 nm/ 630 nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。充分混勻，終止后即讀數(shù)。
【結(jié)果判定】
在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.60，陰性對照孔的平均OD值＜0.40；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值－NCx)/(PCx－NCx)，其中NCx表示陰性對照孔平均OD450/630值（若小于0.05，則按照0.05計算），PCx表示陽性對照孔平均OD450/630值；
當樣本的S/P≥0.20時判為陽性；樣品S/P值＜0.20時判為陰性。
【注意事項】
1.請在使用試劑盒之前，仔細閱讀說明書。
2．請不要使用過期的試劑盒組分，不要將不同批次的組分混合使用。
3．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應(yīng)經(jīng)121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30 min后廢棄。
4．未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2 ℃-8 ℃避光保存。
5．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。
6．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
7．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲存條件及有效期】
于2 ℃－8 ℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。
【生產(chǎn)日期及批號】
詳見外包裝盒
僅供獸醫(yī)診斷使用
