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新鮮果蔬易受病原微生物侵染而*變質(zhì)，果蔬的采后防腐保鮮已成為*的重點研究內(nèi)容?；瘜W(xué)防腐劑以其使用簡便、*而被廣泛應(yīng)用。但是，隨著科學(xué)知識的普及，人們對于化學(xué)合成物質(zhì)對人體的危害已有了一定的認(rèn)識。天然防腐劑的研究與開發(fā)利用正是目前市場和消費者的迫切需要。中草藥具有藥食兼?zhèn)?、作用持久等?yōu)勢，其中有部分中草藥經(jīng)長期實驗和現(xiàn)代微生物手段證明，均能阻止病原微生物的生長，屬理想的天然抑菌防腐材料。筆者對丁香、桂皮提取液和抑菌效果進(jìn)行了研究和比較。為開發(fā)天然食品防腐保鮮劑提供理論依據(jù)。
1、材料和方法
1．1菌種來源
黑曲霉菌、米曲霉菌、酵母菌均來自山西大學(xué)生物工程實驗室。
1．2 中草藥來源
丁香、肉桂、高良姜、烏梅、知母均購自中藥材商店；芥菜籽購自農(nóng)資市場。
1．3 培養(yǎng)基
1．3．1察氏培養(yǎng)基蔗糖30g；NAN032g；KCI 5 g；K~HP04·3HzD 1g；FeSO4·7H20O．O1g；MgSO4·7HzD0_5g；瓊脂15-20g；水1000mL。
1.3.2 麥芽糖培養(yǎng)基蛋白胨10g；麥芽糖20g；酵母膏5 g；瓊脂15-18 g；蒸餾水1 000mL。
1．4 菌懸液制備
1．4．1 霉菌菌懸．液 將米曲霉和黑曲霉用劃線方法接種于察氏固體培養(yǎng)基上，在27℃下培養(yǎng)一周，使其分離成米粒大小的單個菌落。將單個菌落移種于察氏液體培養(yǎng)基中，在27℃下恒溫?fù)u菌7天。離心分離，棄去上清液。加少量無菌水，用超聲波打碎，使其形成一定濃度的菌懸液。該試驗使用的菌懸液濃度用450 nm 吸光值來標(biāo)定，黑曲霉為0．157，米曲霉為0．216。
1.4.2 酵母菌菌懸液取酵母菌活化，分離，于麥芽糖液體培養(yǎng)基中，在28℃恒溫下?lián)u菌28 h。使其形成一定濃度的菌懸液。
1．5 中草藥提取液制備
將洗凈晾干的供試中草藥樣品粉碎，用40目篩過濾。用75％ 的乙醇配成固液比為1：4的浸提體系， 于78℃的水浴中提取4h。過濾，取上清液，常溫保存。
1．6 抑菌實驗(平板對峙培養(yǎng))
1．6．1 霉菌抑菌實驗方法將固體察氏培養(yǎng)基溶化高壓滅菌后倒入平皿，待冷卻凝固后，對稱插入兩個已滅菌的直徑為1 em的接種環(huán)。于培養(yǎng)皿兩個接種環(huán)中間的部位接入10 uL菌懸液，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天。待霉菌長成1 em左右的菌株后，將200 uL中藥提取液加入接種環(huán)內(nèi)，同時做無菌水和75％ 乙醇的空白對照。28℃恒溫下培養(yǎng)，隨時觀察。
1．6．2 酵母菌抑菌實驗方法將固體麥芽糖培養(yǎng)基溶化高壓滅菌后倒入平皿，待冷卻凝固后，接入50 uL菌懸液，并用刮棒均勻涂開。對稱插入2個已滅菌的直徑為1 em 的接種環(huán)，每個接種環(huán)內(nèi)加入200 uL中藥提液，同時做無菌水和75％乙醇的空白對照。在28℃ 恒溫下培養(yǎng)，隨時觀察。
2、結(jié)果與分析
2．1 實驗內(nèi)容設(shè)置
本項實驗以無菌水為空白，以提取溶劑75％ 乙醇為對照，在進(jìn)行抑菌實驗的同時，加入空白和對照實驗，以保證實驗的準(zhǔn)確可靠。
2．2 不同中草藥抑菌效果比較
用6種中草藥提取液對供試的霉菌和酵母菌進(jìn)行抑菌篩選對比實驗。實驗結(jié)果表明，所選6種中草藥對霉菌和酵母菌均有不同程度的抑制作用，以丁香和肉桂抑菌效果優(yōu)良。其中丁香對2種供試的霉菌抑制效果zui為顯著，肉桂次之。肉桂對酵母菌抑制效果zui為顯著，丁香次之。其它4種中草藥雖對霉菌和酵母菌有抑制作用，但效果不明顯，見表1。
2.3 丁香對霉菌抑菌效果
霉菌的平板對峙培養(yǎng)結(jié)果表明，丁香提取液對米曲霉和黑曲霉的抑制效果zui顯著。該實驗持續(xù)觀察30天，在未加抑菌劑前，菌株長勢良好，加入抑菌劑后霉菌孢子受抑萎縮，且在觀察期間無生長跡象。而空白和對照的菌株則生長旺盛，孢子長滿整個培養(yǎng)皿，見圖1。
2．4 肉桂對酵母菌抑菌效果
酵母菌的平板對峙培養(yǎng)結(jié)果表明，肉桂提取液對酵母菌的抑制效果zui為顯著。在30天的實驗觀察期內(nèi)，肉桂提取液的抑菌圈zui大，且抑菌圈未見縮小?？瞻椎慕湍妇L滿整個培養(yǎng)皿，對照則除接種圈內(nèi)部外，酵母菌布滿培養(yǎng)皿，見圖2。
2．5 中草藥抑菌有效期的調(diào)查
丁香對霉菌顯示出很強的抑制作用，并且在2個月的觀察期內(nèi)可有效地抑制霉菌生長繁殖，并使孢子受抑萎縮。研究趨勢表明，丁香可長期有效地抑制霉菌生長。見表3、圖3。
3、討論
試驗通過對6種具有抑菌效果中草藥的提取液和抑菌效果進(jìn)行研究比較，丁香提取液抑菌*，而且具有色澤淺淡、香氣純正等特點，特別適合作為食品用天然防腐劑。桂皮提取液對供試酵母菌株表現(xiàn)出優(yōu)良的抑制效果，但其提取液色澤較深、香氣濃厚，宜稀釋后使用。丁香對霉菌顯示出很強的抑制作用，并且在2個月的觀察期內(nèi)可有效地抑制霉菌生長繁殖，并使孢子受抑萎縮。該項研究針對果蔬貯藏中的易染菌進(jìn)行生長抑制實驗，為開發(fā)新型果蔬用天然防腐劑提供了理論依據(jù)。將其推廣和應(yīng)用必將帶來巨大的經(jīng)濟和社會效益。