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熒光顯微鏡

從光源的作用上來看，普通光學(xué)顯微鏡是利用可見光使鏡下標(biāo)本得

到照明，通過放大系統(tǒng)進(jìn)行觀察，因此，看到的是樣品的本色，光源起

到照明作用；而熒光顯微鏡(fluorescence microscope)則是利用一定

波長(zhǎng)的光激發(fā)樣品，使其產(chǎn)生熒光，通過放大系統(tǒng)放大后，看到的不是

樣品的本色，而是其熒光．所以光源起到的是激發(fā)作用，而非照明。由

此看出．熒光顯微鏡的主要特點(diǎn)在于其光源。按激發(fā)光照射的方式．有

透射和落射2種。熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)和主要部件包括以下幾部分。

(1)光源。熒光顯微鏡一般采用200W的超高壓汞燈作為光源．由石

英玻璃制作，超高壓汞燈發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光

物質(zhì)。另外超高壓汞燈工作時(shí)散發(fā)出大量熱能，因此，燈室必須有良好

的散熱條件。

(2)濾色系統(tǒng)。濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部件，由激發(fā)濾板和

壓制濾板組成。根據(jù)光源和熒光色素的特點(diǎn)．激發(fā)濾板分為3類：紫外

光激發(fā)濾板、藍(lán)光激發(fā)濾板和紫藍(lán)光激發(fā)濾板，分別可以提供一定波長(zhǎng)

范圍的激發(fā)光。壓制濾板的作用是阻擋激發(fā)光通過，提供相應(yīng)波長(zhǎng)

范圍的熒光，與激發(fā)濾板相對(duì)應(yīng)，有3種壓制濾板：紫外光壓制濾板、

藍(lán)光壓制濾板和紫藍(lán)光壓制濾板。

(3)反光鏡。反光鏡的反光層一般是鍍鋁的，因?yàn)殇X對(duì)紫外光和可

見光的藍(lán)紫區(qū)吸收少，反射達(dá)90％以上(銀的反射只有70％)。一般使用

平面反光鏡。

(4)聚光鏡。專為熒光顯微鏡設(shè)計(jì)制作的聚光鏡是用石英玻璃或其

他透紫外光的玻璃制成，分明視野聚光鏡和暗視野聚光鏡2種。

(5)物鏡。各種物鏡均可應(yīng)用．但用消色差的物鏡，因其自體

熒光極微，且透光性

(6)目鏡。在熒光顯微鏡中多用低倍目鏡，如5×和6．3×。過去多

用單筒目鏡，因?yàn)槠淞炼缺入p筒目鏡高1倍以上，但目前研究型熒光顯

微鏡多用雙筒目鏡，方便觀察。

(7)落射光裝置。落射熒光顯微鏡還具有落射光裝置，落射光裝置

可使熒光圖像的亮度隨著放大倍數(shù)增大而提高，在放大倍數(shù)高時(shí)比透射

光源強(qiáng)，更適用于不透明及半透明標(biāo)本，如厚片、濾膜、菌落、組織培

養(yǎng)標(biāo)本等的直接觀察。近年研制的新型熒光顯微鏡多采用落射