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b免疫化學(xué)發(fā)光法(雙抗體夾心法)測定IgE
[檢測方法] 免疫化學(xué)發(fā)光法(雙抗體夾心法)。
[方法學(xué)原理] 加入與磁性顆粒共價結(jié)合的鼠抗人IgE抗體、待測標本以及吖啶酯標記的羊抗人IgE抗體(1gElite試劑),經(jīng)過溫育形成固相包被抗體—抗原(1gE)—吖啶酯標記抗體復(fù)合物,經(jīng)洗滌后,加人氧化劑(H2O2)發(fā)光,其光量子數(shù)與IgE濃度呈良好的線性相關(guān)。通過光量子數(shù)與IgE濃度制作標準曲線,根據(jù)樣本產(chǎn)生的光量子數(shù)可得出IgE含量。
[標本準備] 靜脈血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.免疫化學(xué)發(fā)光法配套試劑及定標液
2.質(zhì)控物(高、中、低)
[儀器] ACSl80免疫發(fā)光儀。
[檢測步驟]
1.將血清編號后加入反應(yīng)管內(nèi),插入樣品盤;
2.將試劑放入試劑盤;
3.將編號及樣品盤號對應(yīng)輸入電腦,并選擇檢測項目IgE,保存;
4.按START鍵運行。
5.ACSl80儀將30/Il樣本液裝入反應(yīng)杯中;將100u1 IgE lite試劑與450ul總IgE固相試劑加入,并于37℃環(huán)境中溫浴7.5min;用去離子水沖洗、分離反應(yīng)相;加入300tA試劑1與試劑2以啟動光化學(xué)反應(yīng),反應(yīng)完成后自動報告結(jié)果(詳情見各儀器系統(tǒng)操作說明)。
[正常參考值] 0—378U/m1
[注意事項]
1.試劑取出應(yīng)充分混勻。
2.樣本應(yīng)充分凝固,無纖維、氣泡及其他物質(zhì)。
3.樣本檢測應(yīng)在8h內(nèi)完成,否則應(yīng)置2~8℃保存。
4.48h內(nèi)不檢測,應(yīng)將樣本于一20℃凍存,且只能凍融1次。
5.若試劑室溫放置超過40h應(yīng)棄之不用,不使用任何過期試劑。
[臨床意義] IgE升高,主要見于過敏性疾病。在感染性疾病中,如寄生蟲感染、支氣管—肺曲霉菌病也可升高。
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