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EDTA脫鈣液使用說明書

來源:南京森貝伽生物科技有限公司   2019年04月18日 11:58   1799

EDTA脫鈣液使用說明書

【產(chǎn)品組成】

Component

SBJ-0312S

SBJ-0312M

Store at

EDTA 脫鈣液

500ml

5L

4℃

【保存條件】

4℃,12個月

【產(chǎn)品概述】

  在組織切片過程中,一些組織內(nèi)含有a骨質(zhì)或鈣化灶時,含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。這是因為鈣和石蠟之間的密度不同,較難切出完整的切片。對含鈣組織建議固定之后,再進行脫鈣或二者同時進行。然后進行下游操作如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多,脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA是一種相對較好的螯合脫鈣劑,對組織結(jié)構(gòu)影響小,可以較好的保存組織的某些酶類,經(jīng)EDTA脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢,一般脫需要數(shù)周至數(shù)月。

  EDTA 脫鈣液主要由EDTA、磷酸鹽等組成,pH值為7.2。其優(yōu)點是:①經(jīng)EDTA 脫鈣的組織染色結(jié)果好;②對組織的結(jié)構(gòu)損害小。其缺點是:①脫鈣速度很慢,不適合常規(guī)標(biāo)本脫鈣使用;②脫鈣后組織會稍微變硬;③不宜用化學(xué)方法確定脫鈣終點。

【使用方法】

1、骨組織脫鈣時,取材不易過厚,一般大約5mm。

2、組織固定后,用PBS清洗3次,每次20min。

3、組織用蒸餾水洗清洗3次,每次20min。

4、組織轉(zhuǎn)移至20~30倍體積的EDTA 脫鈣液中,脫鈣10~30天或更長時間。如果想加快脫鈣速度,可以置于37℃進行脫鈣。如果必要,更換新的EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣,多數(shù)組織脫鈣2周~3個月即可,每周更換一次直至終點。亦可采用微波快速脫鈣法:微波爐設(shè)在200W左右的檔位,每次加熱5min,依據(jù)組織厚度和密度重復(fù)3~5min,中間間隔3~5min。

5、用蒸餾水沖洗數(shù)次。

6、常規(guī)脫水、包埋。

【注意事項】

1、厚度5mm的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣10~30天即可,大多數(shù)在14~60天即可。

2、適當(dāng)加溫能加快脫鈣的速度,一般不應(yīng)超過37~40℃,溫度過高容易使骨組織造成松散解體,尤其不可大于60℃。

3、脫鈣應(yīng)*,防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時盡量縮短脫鈣時間,以免脫鈣過長引起組織損害。

4、脫鈣用具避免使用金屬容器,盡量使用玻璃容器。

5、骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行,不應(yīng)先脫鈣后固定,以便減少組織的損傷程度。

6、每隔一段時間檢測一次脫鈣程度,脫鈣過度會增加組織的損傷程度,影響染色結(jié)果。

7、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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