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一、發(fā)酵罐、生物發(fā)酵罐使用前的技術(shù)準(zhǔn)備
1. 對(duì)發(fā)酵罐操作人員上崗前的技術(shù)培訓(xùn):GRJ-D發(fā)酵罐是機(jī)電一體化的高科技設(shè)備,因此;操作人員上崗前必須進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn),使他們熟悉整個(gè)發(fā)酵系統(tǒng)的工作原理、管路、閥門的操作程序,并對(duì)空壓機(jī)、電熱蒸汽發(fā)生器能正確操作使用。未經(jīng)培訓(xùn)的人員,不得單獨(dú)上崗操作。
2. 在發(fā)酵罐開(kāi)機(jī)使用之前,應(yīng)先檢查電源是否正常,空壓機(jī)、蒸汽發(fā)生器、循環(huán)水系統(tǒng)是否能正常工作。
3. 檢查整個(gè)系統(tǒng)上的閥門、接頭及緊固螺釘是否擰緊。
4. 開(kāi)動(dòng)空壓機(jī),用0.15Mpa壓力,檢查發(fā)酵罐、過(guò)濾器、管路、閥門的密封性能是否良好,有無(wú)泄漏。
5. 溶氧儀、pH儀、PLC系統(tǒng)應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢查、校正。
6. 上崗人員對(duì)上述發(fā)酵罐的各項(xiàng)必須能熟練操作。
二、空消
在投料前,氣路、料路、發(fā)酵罐必須用蒸汽進(jìn)行滅菌,消除所有死角的雜菌,保證系統(tǒng)處于無(wú)菌狀態(tài)。
1. 空氣管路的空消
(1) 空氣管路上有除水減壓閥,和除菌過(guò)濾器。除水減壓閥不能用蒸汽滅菌,因此在空氣管路通蒸汽前,必須將通向除水減壓閥的閥門KQF1關(guān)死,使蒸汽通過(guò)蒸汽過(guò)濾器然后進(jìn)入除菌過(guò)濾器。
(2) 空消過(guò)程中,除菌過(guò)濾器下端的排氣閥應(yīng)微微開(kāi)啟,排除冷凝水。
(3) 空消時(shí)間應(yīng)持續(xù)40分鐘左右,當(dāng)設(shè)備初次使用或長(zhǎng)期不用后啟動(dòng)時(shí),采用間歇空消,即*次空消后,暫定3~5小時(shí)再空消一次,以便消除芽孢。
(4) 經(jīng)空消后的過(guò)濾器,應(yīng)通氣吹干,約20~30分鐘,然后將氣路閥門關(guān)閉。
2.發(fā)酵罐空消
(1)發(fā)酵罐是將蒸汽直接通入罐內(nèi)進(jìn)行空消。
(2) 空消時(shí),應(yīng)將罐上的接種口,排氣閥,及料路閥門微微打開(kāi),使蒸汽通過(guò)這些閥門排出,同時(shí)保持罐壓為0.13~0.15Mpa。
(3) 空消時(shí)間為30~40分鐘,特殊情況下,可采用間歇空消。
(4)空消結(jié)束后,應(yīng)將罐內(nèi)冷凝水排掉。
注意:1.發(fā)酵罐空消時(shí),應(yīng)將夾套內(nèi)的水放掉,空消時(shí)將夾套排水閥打開(kāi),
以防夾套水排不凈。
2.空消時(shí),溶氧、pH電極應(yīng)取出,可以延長(zhǎng)其使用壽命。
三、實(shí)消
實(shí)消是當(dāng)發(fā)酵罐罐內(nèi)加入培養(yǎng)基后,用蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的過(guò)程。
1. 空消結(jié)束后,首先需將pH、Do電極校正好后裝入罐體中的接頭中,然后將配好的培養(yǎng)基從加料口加入罐內(nèi),此時(shí)夾套內(nèi)應(yīng)無(wú)冷卻水。
2. 培養(yǎng)基在進(jìn)罐之前,應(yīng)先糊化,一般培養(yǎng)基的配方量以罐體全容積的70%左右計(jì)算(泡沫多的培養(yǎng)基為65%左右,泡沫少的培養(yǎng)基可達(dá)75~80%),考慮到冷凝水和接種量因素,加水量約為罐體全容積的50~60%左右,加水量的多少與培養(yǎng)基溫度和蒸汽壓力等因素有關(guān),需在實(shí)踐中摸索。
3. 為了減少蒸汽冷凝水,實(shí)消先利用夾套通蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)熱,保持夾套壓力≤0.1Mpa,待培養(yǎng)基溫度到達(dá)
4. 當(dāng)罐壓升至0.12Mpa,溫度升到121~
5. 打開(kāi)冷卻水的進(jìn)排閥門,在夾套內(nèi)通水冷卻。
注意:1.在夾套通水冷卻時(shí),罐壓會(huì)急劇下降,當(dāng)罐內(nèi)壓力降至0.05Mpa時(shí),微微
開(kāi)啟排氣閥和進(jìn)氣閥,開(kāi)啟電機(jī)進(jìn)行通氣攪拌,加速冷卻速度,并保持罐壓為
0.05Mpa,直到罐溫降至接種溫度。
四、接種、培養(yǎng)
1. 本設(shè)備采用火焰封口接種,接種前應(yīng)事先準(zhǔn)備好酒精棉花、鉗子、鑷子和接種環(huán)。
2. 菌種裝入三角燒瓶?jī)?nèi),接種量根據(jù)工藝要求確定。
3. 將酒精棉花圍在接種口周圍點(diǎn)燃,用鉗子或鐵棒擰開(kāi)接種口,此時(shí)應(yīng)向罐內(nèi)通氣,使接種口有空氣排出。
4. 將三角瓶的菌種在火環(huán)中間倒入罐內(nèi)。
5. 將接種口蓋在火焰上滅菌后擰緊。
6. 接種后即可通氣培養(yǎng),罐壓保持在0.05Mpa。
7. 發(fā)酵溫度根據(jù)工藝要求而定,通過(guò)調(diào)節(jié)循環(huán)水的溫度來(lái)控制發(fā)酵溫度,當(dāng)環(huán)境溫度高于發(fā)酵溫度時(shí),需用冷水降溫。
8. 溶氧量的大小主要通過(guò)調(diào)節(jié)進(jìn)氣量來(lái)實(shí)現(xiàn)。
9. pH的調(diào)節(jié)是由控制系統(tǒng)通過(guò)執(zhí)行機(jī)構(gòu)(蠕動(dòng)泵)自動(dòng)加堿來(lái)實(shí)現(xiàn)。
10. 泡沫報(bào)警是由泡沫探頭探測(cè)到泡沫液位信號(hào)在觸摸屏上以指示燈的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)。
11. 在發(fā)酵中途要取樣檢查時(shí),可通過(guò)取樣口取樣。取樣前,取樣管路閥門需用蒸汽滅菌,防止雜菌污染而引起誤導(dǎo),取樣結(jié)束后同樣要用蒸汽沖洗取樣管道閥門。
五、出料
1. 本設(shè)備的出料是利用罐壓將發(fā)酵液從出料管道排出,根據(jù)發(fā)酵液的濃度,罐壓可控制在0.05~0.1Mpa。
2. 出料后取出溶氧、pH電極,進(jìn)行清洗保養(yǎng)。
3. 出料結(jié)束后,應(yīng)立即放水清洗發(fā)酵罐及料路管道閥門,并開(kāi)動(dòng)空壓機(jī),向發(fā)酵罐供氣攪拌,將管路中的發(fā)酵液沖洗干凈。
六、 發(fā)酵罐的維修與保養(yǎng)
1. 安置設(shè)備的環(huán)境應(yīng)整潔、干燥、通風(fēng)良好,水、汽不得直接潑到電器上。
2. 設(shè)備啟用之后,必須及時(shí)清洗,防止發(fā)酵液干結(jié)在發(fā)酵罐及管路、閥門內(nèi)。
3. 溶解溶氧、pH探頭、儀表,應(yīng)按規(guī)定要求保養(yǎng)存放,壓力表、安全閥、溫度儀每年應(yīng)校準(zhǔn)一次。
5. 設(shè)備停止使用時(shí)應(yīng)清洗、吹干。過(guò)濾器的濾芯應(yīng)取出清洗、涼干,妥善保管,法蘭壓緊螺母應(yīng)松開(kāi),防止密封圈*變形。
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