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詳細(xì)介紹
| 黃曲霉素B1 ELISA試劑盒 型號(hào):SKLS15B1 | 貨號(hào): |
| 黃曲霉素B1 ELISA試劑盒 96T 黃曲霉素（AFB1） 酶聯(lián)免疫試劑盒 1 概述 *是由曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要污染玉米、花生、堅(jiān)果等。天然污染的*以AFB1為主，AFB1具有*的急性毒性和致癌性，肝臟是其主要的靶器官。本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測(cè)方法，適用于定量檢測(cè)飼料和谷物中的黃曲霉素B1。 2 原理 本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔板包被有黃曲霉素偶聯(lián)抗原，加入黃曲霉素B1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離黃曲霉素B1與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉素B1偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗黃曲霉素B1抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中黃曲霉素B1含量成反比。 3 試劑盒組成 3.1 預(yù)包被的AFB1偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。 3.2 AFB1標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。 3.3抗AFB1抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml），棕色溶液。 3.4顯色液A：1瓶（6ml），過(guò)氧化脲。 3.5顯色液B：1瓶（6ml），四甲基聯(lián)苯胺。 3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。 3.7*：1瓶（10×，25ml），用于樣品稀釋用。 3.8濃縮洗滌液：1瓶（10×，40ml），用于洗板。 3.9說(shuō)明書一份。 4 需要而未提供的材料 4.1 設(shè)備 4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。 4.1.2粉碎機(jī)。 4.1.3量筒。 4.1.4振蕩器。 4.1.5漏斗。 4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。 4.1.7微量移液器。 4.2 試劑 4.2.1去離子水或蒸餾水。 4.2.2 甲醇。 5 貯存 5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍 5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存 6 注意事項(xiàng) 6.1 使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。 6.2 不要使用過(guò)期試劑盒。 6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。 6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有黃曲霉素，使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。 6.5 終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。 6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。 6.7 不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的*，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 6.9 混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。 7 工作液準(zhǔn)備 7.1 AFB1標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml 7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋 7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照 7.4 反應(yīng)終止液：已備用 8 樣品處理程序（樣品在提取過(guò)程中，要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作，提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存） 8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液 8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘 8.3用Whatman 濾紙過(guò)濾 8.4取100µl處理后的樣品，加入400µl* 8.5取50μl稀釋液進(jìn)行分析（稀釋倍數(shù)10） 9 酶免分析步驟 9.1 實(shí)驗(yàn)須知 9.1.1 實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存 注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的精確度和準(zhǔn)確度。 9.1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存 9.1.3 請(qǐng)不要改變分析程序 9.1.4 請(qǐng)使用精確的微量移液器 9.1.5 操作一旦開始，請(qǐng)不要中斷任何程序 9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性*程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作 9.1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣 9.1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面 9.2 分析步驟 9.2.1 預(yù)*行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，*進(jìn)行雙孔檢測(cè) 9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存 9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液 9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液 9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液 9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結(jié)合物 9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。 9.3 室溫下（25±2℃）溫浴10min （溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差） 9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。 9.4 反應(yīng) 9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻 9.4.2 室溫下（25±2℃）溫浴10min 9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻 9.4.4 在450nm下檢測(cè)吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。 10 結(jié)果計(jì)算 10.1定量分析 10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以*，即百分吸光度值。 B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 10.1.2以黃曲霉素B1濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為AFB1濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中AFB1濃度C（ng/ml） 10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。 10.2 半定量測(cè)定 10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。 10.1.2儀器半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。 11 特異性 物質(zhì) 交叉反應(yīng) 黃曲霉素B1 * 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30% 12 試劑盒參數(shù) 本試劑盒檢測(cè)下限為0.1ppb B0吸光度值應(yīng)大于1.0 試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。 用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。 13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式（僅供參考） 試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml。 14 分析限制 本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。 | 產(chǎn)品圖片 |
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