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北京伯樂生命科學發(fā)展有限公司上海辦事處 (上海天崛電子科技有限公司)

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美國伯樂Bio-rad變性梯度凝膠電泳(DGGE)

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  • 2021-11-11 18:55:25
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【簡單介紹】

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【詳細說明】

運用DGGE搜尋未知突變

DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區(qū)域。當溫度達到zui低熔解度區(qū)域的熔解溫度(Tm) 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環(huán)境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%(Grompe 1993)。DCode 系統(tǒng)通過以下途徑優(yōu)化DGGE:

  • 溫度控制模塊提供45–70°C 內的*運行溫度
  • 系統(tǒng)可運行2 塊16 x 16 cm 凝膠或4 塊7.5 x 10 cm 凝膠
  • 可選擇的MacMelt 或WinMelt 軟件優(yōu)化了GC 夾及引物的置放

DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE(80V,56°C,2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數(shù)據(jù)。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉(37.5:1) 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C,150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。

 

DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區(qū)域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA 片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA 片段可熔解形成2條單鏈。

 

 

 

運用DGGE搜尋未知突變

DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區(qū)域。當溫度達到zui低熔解度區(qū)域的熔解溫度(Tm) 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環(huán)境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%(Grompe 1993)。DCode 系統(tǒng)通過以下途徑優(yōu)化DGGE:

  • 溫度控制模塊提供45–70°C 內的*運行溫度
  • 系統(tǒng)可運行2 塊16 x 16 cm 凝膠或4 塊7.5 x 10 cm 凝膠
  • 可選擇的MacMelt 或WinMelt 軟件優(yōu)化了GC 夾及引物的置放

DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE(80V,56°C,2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數(shù)據(jù)。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉(37.5:1) 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C,150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。

 

DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區(qū)域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA 片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA 片段可熔解形成2條單鏈。
    
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