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技術(shù)文章
小鼠肝炎病毒（MHV）ELISA試劑盒使用說明書
點(diǎn)擊次數(shù)：570 發(fā)布時(shí)間：2011-6-13
小鼠肝炎病毒（MHV）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：小鼠肝炎病毒（MHV）抗原酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒定性測(cè)定小鼠血液、或其它相關(guān)組織中肝炎病毒（MHV）
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中小鼠肝炎病毒（MHV）。用純化的小鼠肝炎病毒（MHV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中肝炎病毒（MHV）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中小鼠肝炎病毒（MHV）的存在與否。
試劑盒組成：
| 1 | 20倍濃縮洗滌液 | 30ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1/瓶 | 8 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對(duì)照 | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本處理及要求：
1．標(biāo)本處理：（1）血清、血漿標(biāo)本：可直接檢測(cè)
（2）其它標(biāo)本：按相關(guān)文獻(xiàn)制備。
2．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl（或一滴），空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl（或一滴），再加入顯色劑B 50μl（或一滴），輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl（或一滴），終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.20
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為小鼠肝炎病毒（MHV）陰性
陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為小鼠肝炎病毒（MHV）陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
8. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)..
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月