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GUS染色液(即用型)使用說明書

【產(chǎn)品組成】

【保存條件】

室溫避光，-20℃，6個月

【產(chǎn)品概述】

  GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標記用于植物轉基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達E.coliGUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質為底物，其反應產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號為18656-96-7，是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測植物中GUS基因融合標記。

  GUS染色液(即用型)又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑(-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質，該物質不溶解于轉基因的細胞核組織中的靛藍物質，具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點，可用肉眼或顯微鏡觀察到。GUS染色液可用于生物化學活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學染色，多用于轉基因植物的GUS基因表達分析，該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡便。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

【使用方法】

1、配制X-Gluc溶液(50x)：取1mlX-Gluc Solution*加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存，1個月有效。

2、配制X-Gluc染色液：取適量的X-Gluc溶液(50x)和GUS Buffer，按1：49比例充分混勻，配制成X-Gluc染色液，如取0.2mlX-Gluc溶液(50x)加入到9.8mlGUS Buffer中，即配成10mlGUS染色液，該染色液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以4℃保存3天。

3、取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色液，使GUS染色液*浸沒組織。

4、37℃孵育1-24h，隨著孵育時間的延長，藍色漸漸出現(xiàn)，當表達量較高時，GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點。

5、用70%乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1～3h，至陰性對照呈白色。如有必要可重復該脫色步驟，以便*清除葉綠素。樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學顯微鏡下觀察，白色背景上的藍色即為GUS表達位點。

【注意事項】

1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存3天。

2、由于組織特異性等原因，藍色顏色反應可能不*一致，應注意摸索具體實驗條件。擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗根就可直接染色；煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉須在染色前切成薄片（1-3mm）；當操作大的組織和樣品時，可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞，建議采購常規(guī)GUS染色液。