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Gey's紅細(xì)胞裂解液(Gey's Lysis Buffer)使用說(shuō)明書(shū) 

【產(chǎn)品組成】

【保存條件】

 4℃,1個(gè)月

【產(chǎn)品概述】

  在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞。去除紅細(xì)胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Gey's Lysis Buffer是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無(wú)核紅細(xì)胞的溶液，主要由磷酸鹽、葡萄糖、NH₄Cl等組成。

  Gey's Lysis Buffer經(jīng)過(guò)優(yōu)化配方，含碳酸鹽、Ca²⁺、Mg²⁺，在裂解無(wú)核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)高壓滅菌及過(guò)濾除菌，經(jīng)過(guò)Gey's Lysis Buffer處理過(guò)的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)，尤其適用于去除皮細(xì)胞脾細(xì)胞中的紅細(xì)胞。

【使用方法】

(一)組織細(xì)胞樣本

1、制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)過(guò)*或膠原酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、裂解:加入5倍細(xì)胞沉淀體積的Gey'sLysisBuffer，輕柔吹打混勻，立即冰浴裂解5min。

3、加入*FCS，4℃300g離心10min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量HBSS，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作，所加入HBSS的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。

6、如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。

7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(二)血液樣本

1、取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，棄上清。

2、裂解:加入6～10倍細(xì)胞沉淀體積的Gey's Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，立即冰浴裂解5min。本(特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解5min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至5～10min，并且裂解過(guò)程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3、加入*FCS，4℃300g離心10～15min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量HBSS，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作，所加入HBSS的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的Gey's Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作，并在4℃裂解10～15min。對(duì)于鼠的血液，裂解15min已經(jīng)足夠；對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至20min，但通常不宜超過(guò)20min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

【注意事項(xiàng)】

1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞丌會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。

6、如果經(jīng)過(guò)Gey's Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液，即無(wú)需在該操作中特意去除RNase。

7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。