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DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒(20×)使用說明書 

【產品組成】

【保存條件】

 —20℃,避光,12個月

【產品概述】

  DAB辣根過氧化物酶顯色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一種依據辣根過氧化物酶(HRP)結合顯色，用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜顯色的試劑盒。DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶的催化下,DAB會產生棕色沉淀，該棕色沉淀丌溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后,還可以使用溶于乙醇的染料進行后續(xù)染色。

  本顯色液可以用于細胞或組織在免疫組化或原位雜交時結合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的辣根過氧化物酶顯色。

【使用方法】

1、常規(guī)組織切片、細胞樣品、膜不辣根過氧化物酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3～5次，每次3～5min。對于檢測內源性辣根過氧化物酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也可用洗滌液洗滌3～5次，每次3～5min。

2、按(A):試劑(B):蒸餾水=1:1:18的比例混合,即為DAB染色工作液，即配即用。

3、洗滌過組織后，去除洗滌液，加入適量DAB染色工作液，確保覆蓋樣品。

4、室溫避光孵育30min或更長時間，直至顯色至預期深淺。

5、去除DAB染色工作液，用蒸餾水清洗1～2次即可終止顯色反應。

6、對組織切片或細胞樣品，反應終止后，如有必要可用中性紅染色液染色，便于觀察。對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

【常見問題及可能原因】

1、背景顯色太深

①在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當的封閉液進行封閉，例如選購適當的封閉液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。也應請注意選購經過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進行含內源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內源性過氧化氫酶?？梢栽?體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取?/span>

④選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

2、沒有顯色或顯色太弱

①當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被a正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用*檢測體系。

③適當延長顯色時間，另外確定抗原修復是否對于使用的一抗是必需的。

【注意事項】

1、DAB是致癌物，請注意適當防護。

2、試劑(A)、試劑(B)避免反復凍融。

2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。