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流式細胞術同型對照如何選擇抗體？
閱讀：1295 發(fā)布時間：2021-2-23流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）是一種對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒（如微球，細菌，小型模式生物等）逐個進行快速定量分析和分選的技術。
一、為什么要用同型對照？
同型對照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性與細胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對照是真正意思上的陰性對照，它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。
二、如何選擇同型對照？
分析流式結(jié)果時，不能因為得到了熒光信號就判斷細胞表面肯定結(jié)合有相應的熒光素，從而得出細胞表達相應的抗原分子的結(jié)論，而應該比較該熒光信號與細胞的非特異性熒光，如果得到的熒光信號大于非特異性熒光，說明得到的熒光信號部分來源于熒光素的特異性熒光，就可以得出細胞表達相應的抗原分子的結(jié)論。
所以，確定與熒光素無關的細胞自身的非特異性類光的強弱非常重要，而設立陰性對照就是為了確定細胞的非特異性熒光。
看看以下3類艾美捷整理的陰性對照流式分析比較全面的陰性對照：
第1類“negative”表示的是不加任何熒光素偶聯(lián)抗體時得到的熒光信號，因為沒有標記任何類光素，所以這組得到的熒光信號與熒光素無關，與細胞抗原分子CD69是否表達無關，得到的熒光信號代表的是非特異性熒光信號；
第2類“抗CD69”表示的是用抗CD69抗體標記樣品細胞后得到的類光信號，雖然抗CD69抗體能修與細胞表面的CD69抗原分子結(jié)合，但是抗CD9抗體沒有偶聯(lián)熒光素，所以得到的熒光信號也與細胞表面是否表達有CD69分子無關，得到的熒光信號代表的也只是細胞本身的非特異性熒光信號，這種對照用于排除抗體的干擾；
第3類“IgG1-PE”表示的是標記與抗CD69抗體同種屬（來源于同一物種）且同類（抗CD69-PE中的抗體IgG1類的）的非特異性抗體（IgG1）與PE熒光素偶聯(lián)的同型（isotype）對照抗體（IgG1-PE）后，得到的熒光信號，這種就屬于同型對照，其不能與細胞表面的CD69發(fā)生特異性結(jié)合，所以細胞表面不會結(jié)合有IgG1-PE，得到的熒光信號是代表細胞本身的非特異性熒光，不屬于PE熒光素產(chǎn)生的特異性熒光信號，這種同型對照用于排除熒光素的干擾。
以上3種陰性對照，并不用全部設置齊全，一般只需要設置1種陰性對照就可以，其中第3種同型對照是常規(guī)的陰性對照設置法。
艾美捷EXBIO作為流式研發(fā)專家，可為您提供流式同型對照抗體：
宿主 | 同型對照 | 貨號 | 名稱 | 應用 |
小鼠 | IgG1 | 11-457-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA |
IgG1 kappa | 11-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，無標記 | FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA | |
12-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control 無標記，低內(nèi)毒素 | FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA, FUNC | ||
1A-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，APC標記 | FC (QC tested) | ||
1B-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，*標記 | WB, ELISA, IHC(F), ICC, IHC(P), IP, FC (QC tested) | ||
1F-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，F(xiàn)ITC標記 | FC (QC tested) | ||
1P-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，PE標記 | FC (QC tested) | ||
A4-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 488標記 | IHC(P), FC (QC tested), ICC, IHC(F), WB | ||
A6-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 647標記 | FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB | ||
A7-632-C100 | Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 700標記 | FC (QC tested) | ||
IgG2a | 11-458-C100 | Mouse IgG2a Isotype Control，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA | |
Mouse IgG2a kappa | 1A-724-C100 | Mouse IgG2a Isotype Control，APC標記 | FC (QC tested) | |
1P-724-C100 | Mouse IgG2a Isotype Control，PE標記 | FC (QC tested) | ||
PC-724-C100 | Mouse IgG2a Isotype Control，PerCP標記 | FC (QC tested) | ||
IgG2b | 11-801-C100 | Mouse IgG2b Isotype Control，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA | |
IgG2b kappa | 1A-692-C100 | Mouse IgG2b Isotype Control，APC標記 | FC (QC tested) | |
1B-692-C100 | Mouse IgG2b Isotype Control，*標記 | WB, ELISA, ICC, IHC(F), IHC(P), IP, FC (QC tested) | ||
1F-692-C100 | Mouse IgG2b Isotype Control，F(xiàn)ITC標記 | FC (QC tested) | ||
IgG3 | 11-459-C100 | Mouse IgG3 Isotype Control ，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA | |
L4-459-C100 | Mouse IgG3 Isotype Control，DyLight 488 | FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB | ||
L6-459-C100 | Mouse IgG3 Isotype Control，DyLight 650 | FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB | ||
IgM | 11-803-C100 | Mouse IgM Isotype Control ，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA | |
1F-803-C100 | Mouse IgM Isotype Control，F(xiàn)ITC標記 | FC (QC tested) | ||
1P-803-C100 | Mouse IgM Isotype Control，PE標記 | FC (QC tested) | ||
L4-803-C100 | Mouse IgM Isotype Control，DyLight488標記 | FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB | ||
大鼠 | IgG2a | 11-168-C100 | Rat IgG2a Isotype Control ，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA |
12-168-C100 | Rat IgG2a Isotype Control ，低內(nèi)毒素 | IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IP, IHC(F), ICC, WB, FUNC | ||
1A-168-C100 | Rat IgG2a Isotype Control，APC標記 | FC (QC tested) | ||
1P-168-C100 | Rat IgG2a Isotype Control，PE標記 | FC (QC tested) | ||
IgG2b | 11-169-C100 | Rat IgG2b Isotype Control ，無標記 | FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA | |
12-169-C100 | Rat IgG2b Isotype Control，低內(nèi)毒素 | IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IHC(F), IP, ICC, WB, FUNC | ||
1F-169-C100 | Rat IgG2b Isotype Control，F(xiàn)ITC標記 | FC (QC tested) |
以下熒光標記同型對照抗體案例展示：
使用小鼠IgG3同種型對照（PPV-07）DyLight®650抗體（樣品中濃度為5ug/ ml）對人外周血進行的流式細胞儀表面非特異性染色模式。
文章來源：艾美捷科技