伏馬菌素B1試劑盒
說明
本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定玉米中的伏馬菌素B1(FB1)。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸,可測單份樣品,也可測多份樣品,定量分析時(shí)需有微孔板酶標(biāo)儀。
1 伏馬菌素B1試劑盒概要
FB1是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素,主要污染玉米及其制品??烧T發(fā)馬的腦白質(zhì)軟化癥和豬的肺水腫綜合癥。FB1對多種動(dòng)物有腎臟毒性、肝臟毒性作用,對大鼠肝細(xì)胞和雞巨噬細(xì)胞有細(xì)胞毒性。據(jù)報(bào)道,F(xiàn)B1與食管癌發(fā)病率有明顯相關(guān)性,癌癥研究中心把FB1劃分到2B組,即人類可能的致癌物。因此FB1對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成潛在威脅,成為繼黃曲霉毒素后的又一個(gè)研究熱點(diǎn)。
目前檢測糧食和飼料中FB1的儀器方法有液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜和毛細(xì)管電泳法等,這些方法靈敏度較高,結(jié)果穩(wěn)定,但所需儀器設(shè)備昂貴,樣品準(zhǔn)備耗時(shí)長,不適于大量樣品的篩選。本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測方法,可以準(zhǔn)確快速檢測玉米中的FB1。
2 測定原理
本試劑盒用固相酶聯(lián)免疫吸附原理,利用間接競爭ELISA法進(jìn)行測定。用抗原包被微孔板,加入FB1標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、FB1單克隆抗體進(jìn)行孵育后,將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去;再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體(酶標(biāo)物)孵育,加入顯色液顯色,經(jīng)終止液終止后,用酶標(biāo)儀在450nm處測定OD值。
3 提供的物品
微孔板
5個(gè)濃度的FB1標(biāo)準(zhǔn)溶液(各1mL)
標(biāo)準(zhǔn)1:0ng/mL ……………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)2:50ng/mL ……………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)3:100ng/mL …………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)4:200ng/mL …………………………………………………………直接使用
標(biāo)準(zhǔn)5:500ng/mL …………………………………………………………直接使用
FB1單克隆抗體溶液(6mL) ………………………………………………………直接使用
酶標(biāo)物(12mL) …………………………………………………………………直接使用
顯色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用
終止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用
濃縮洗液(30mL) …………………………………………………………………稀釋使用
空白對照(6mL) …………………………………………………………………直接使用
4 盒中未提供,需自備物品
微孔板酶標(biāo)儀(含450nm)、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器
量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙
氯化鈉(分析純)、甲醇(分析純)、去離子水或蒸餾水
5 操作者注意事項(xiàng)
標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有FB1毒素,應(yīng)特別小心。
終止液為1N硫酸,避免接觸皮膚。
每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。
每步加樣時(shí)間應(yīng)控制在5min內(nèi)。
孵育過程中應(yīng)避光。
不要使用過期試劑盒。
不要交叉使用不同批號(hào)的試劑盒中的試劑。
6 儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍
顯色液對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中,置2~8℃保存。
7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志
標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8 樣品處理程序
----樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存;
----取5g粉碎的有代表性的樣品,加1.25g氯化鈉及25mL 70%甲醇溶液;
----強(qiáng)力振蕩3分鐘;
----用快速定性濾紙過濾;
----取1mL處理后的樣品,用1%氯化鈉溶液稀釋10倍;
----取50μL稀釋液進(jìn)行分析。
----*根據(jù)需要可以增加樣品量,但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。
9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液,使用時(shí)與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
----取所需數(shù)量的板條插入微孔架,記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。
----加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL抗FB1單克隆抗體使用液到每個(gè)微孔(注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體,避免交叉污染)中,37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板3min×3次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入酶標(biāo)物100mL,37℃孵育60min。
----用洗液洗滌微孔板3min×3次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL(2滴),37℃孵育10min。
----每孔加入終止液50mL(1滴),立即用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定吸光度值(OD值)。
10 樣品濃度計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD值的比值為縱坐標(biāo),所對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(ng/mL)的對數(shù)值為橫坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD的比值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為FB1濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中FB1濃度C(ng/mL),按下列公式計(jì)算出樣品中FB1含量:
FB1含量(mg/kg)= C×K
式中:C:稀釋后樣品提取液中FB1含量(ng/mL)
K:樣品稀釋倍數(shù)(本提取方法為50)
11 主要技術(shù)指標(biāo)及參數(shù)
測試盒zui低檢出濃度54.5ng/mL,回收率70%~120%,交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%,試劑盒校正曲線的線性范圍50ng/mL~500ng/mL,試劑盒條內(nèi)變異<10%,條間變異<15%。