用*的預(yù)裝于電擊杯的方式提供感受態(tài)細胞可 以zui大程度地簡化電擊過程的繁瑣步驟。EasyShock 10B 感受態(tài)細胞由0.1cm 電擊杯和20 µl of EP-Max 10B 電擊組成。優(yōu)點包括:
- 操作過程簡化:只有一個加樣步驟,無需其他小管
- 轉(zhuǎn)化效率:>1 x 108 CFU/反應(yīng)( 足夠量DNA ), 0.5-1.5 x 1010 CFU/µg pUC19 DNA
- 包裝完善緊湊:節(jié)約冷凍空間
另外,EasyShock 10B 具備所有EP-Max 10B 電擊的優(yōu)點
- 通過lacZΔM15 基因的alpha互補進行藍白斑篩選
- 限制性系統(tǒng)突變用于克隆甲基化DNA
- 可以用于大片斷插入質(zhì)粒構(gòu)建(zui大到37Kb)
EasyShock 10B 中使用的EP-Max 10B 電擊。
使用EasyShock 10B 與普通操作步驟的比較
EasyShock 操作步驟 | 普通操作步驟 |
1. 在冰上解凍 | 1. 在冰上預(yù)冷電擊杯和小管 |
2. 將DNA 加入細胞中混合 | 2. 在冰上解凍 |
3. 電擊 | 3. 將細胞轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的小管 |
4. 加入SOC 培養(yǎng)基并鋪板 | 4. 將DNA 加入細胞中混合 |
| 5. 轉(zhuǎn)移懸浮液至電擊杯 |
| 6. 電擊 |
| 7. 加入SOC 培養(yǎng)基并鋪板 |
Bio-Rad 提供以下5 種E.coli,包括化學和電、用于ssDNA 合成的F" 細胞和T1 噬菌體抗性細胞:
- EP-Max10B
- EP-Max10B F"
- EP-Max10B 抗T1
- C-Max 5alpha
- C-Max5alpha F"
【技術(shù)指標】
受體細胞選擇指南 | EP-Max10B | EP-Max10B F" | EP-Max10B 抗T1 | C-Max5alpha | C-Max5alpha F" | 轉(zhuǎn)化效率 cfu*/µg pUC19 DNA | >1 x 1010 | >1 x 1010 | >1 x 1010 | >1 x 109 | >1 x 109 | 用于克隆甲基化DNA 的 mrr, hsdRMS, mcrBC | 有 | 有 | 有 | 無 | 無 | cDNA 克隆 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于ssDNA 合成的F" 基因 | 無 | 有 | 無 | 無 | 有 | 用于藍/白篩選的lacZ?M15 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于調(diào)控表達的lacIq | 無 | 有 | 無 | 無 | 有 | 噬菌體展示 | 無 | 無 | 無 | 無 | 有 | 用于減少重組的recA | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于高質(zhì)量質(zhì)粒制備的endA | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 抗噬菌體感染的tonA | 無 | 無 | 有 | 無 | 無 | * 菌落形成單位 Bio-Rad 基因型 細胞類型 | 轉(zhuǎn)化方法 | 表型 | EP-Max10B | 電穿孔 | F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galKrpsL nupG λ– | EP-Max10B 抗T1 | 電穿孔 | F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galKrpsL nupG λ– tonA | EP-Max10B F" | 電穿孔 | mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK rpsL nupG λ–/F"[lacIqZ?M15 Tn10 (Tetr)] | C-Max5alpha | 熱擊 | F – φ80dlacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk–, mk+) phoA supE44 λ– thi-1 gyrA96 relA1 | C-Max5alpha F" | 熱擊 | φ80dlacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk–, mk+) phoA supE44 λ– thi-1 gyrA96 relA1/F"[lacIq Tn10 (Tetr)] | |