青-霉素酶聯(lián)免疫試劑盒
(一步法)
（貨號：Ounuo98009）
一、藥物概述及檢測原理
本試劑盒利用青-霉素抗體與青-霉素可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì)，先在酶標(biāo)板上預(yù)包被抗原，再加入標(biāo)準(zhǔn)品（樣本）和青-霉素抗體，青-霉素藥物與固定在酶標(biāo)板上的抗原競爭青-霉素抗體，最后加入底物催化顯色。
二、試劑盒內(nèi)包含組分
v 標(biāo)準(zhǔn)品工作液：0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb，1mL/瓶。
v 96孔酶標(biāo)板：1塊
v 11x酶標(biāo)記物濃縮液：1瓶（0.7mL/瓶）
v 酶標(biāo)記物稀釋液：1 瓶（7mL/瓶）
v 20×濃縮洗滌液：1瓶（30 mL/瓶）
v 樣本-稀釋液：1瓶（20 mL/瓶）
v 底物A液：1瓶（7 mL/瓶）
v 底物B液：1瓶（7 mL/瓶）
v 終止液：1瓶（7mL）
v 說明書
v 蓋板膜
v 自封袋
v 合格證
三、需要自備的設(shè)備和試劑
（1）儀器：
v 酶標(biāo)儀（檢測波長450nm、630nm）
v 電子天平（精度：0.01 g）
v 離心機（4000g及以上）
v 生化培養(yǎng)箱（可調(diào)25℃）
v 旋渦振蕩器
v 微量移液器：（20μL-200μL、100μL-1000μL各一支、30-300μL八道排槍）
v 計時器
（2）試劑：（試劑均為分析純）
v 去離子水
v 濃鹽酸（分析純）
四、試劑盒特異性
試劑盒與其他藥物的交叉反應(yīng)率：
v 青霉-素………………………………………100.0
五、樣本檢測步驟
1. 工作液準(zhǔn)備
v 洗滌工作液：取1份20×濃縮洗滌液加去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得。
v 1 M HCl：量取8.6 mL濃鹽酸，加入去離子水定容至100 mL。
2. 樣品前處理
1）組織樣本方法 (稀釋倍數(shù)：10倍)
? 稱取 1.0±0.05g 樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入4 ml去離子水,高速渦動1min，3000g 以上，室溫離心5min；
? 移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入200ul樣本-稀釋液，用渦旋儀渦動10S;
? 取50 ul 用于分析。
2）雞蛋樣本方法 (稀釋倍數(shù)：10倍)
? 稱取 1.0±0.05g 均質(zhì)樣本至10mL聚苯乙烯離心管中，加入4 ml去離子水,再加入150uL 1M HCl（見配液5.1）高速渦動1min，3000g 以上，室溫離心5min；
? 移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入200ul樣本-稀釋液，用渦旋儀渦動10S;
? 取50 ul 用于分析。
3）純牛奶樣本方法 (稀釋倍數(shù)：10倍)
? 移取1.0mL純牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入4 ml去離子水,再加入40uL1 M HCl（見配液5.1）高速渦動1min，3000g 以上，室溫離心5min；
? 移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入200ul樣本-稀釋液，用渦旋儀渦動10S;
? 取50 ul 用于分析。
3. 檢測
? 準(zhǔn)備：將要使用的酶標(biāo)板條插入酶標(biāo)板架上，并記錄各標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，為減小檢測值波動建議做雙孔平行實驗（每個樣本/標(biāo)準(zhǔn)品點兩孔），未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后，保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì)；
? 加樣：向?qū)?yīng)微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品工作液/樣品溶液50 μL；
? 酶標(biāo)記物工作液配制：取1份11X濃縮酶標(biāo)記物加10份酶標(biāo)記物稀釋液按照1:10的比例稀釋即得。（注：請務(wù)必按需現(xiàn)混現(xiàn)用！）
? 向每孔中加入50 μL酶標(biāo)記物工作液；
? 孵育：輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s，使孔內(nèi)液體充分混勻后，蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)30 min；
? 洗滌：取出酶標(biāo)板后小心揭開蓋板膜，倒出板孔中液體后，在每孔加250μL洗滌工作液，浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液，然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4次后，將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上，用力拍干；
? 顯色：在每孔中加入100μL 底物A和底物B的混合液（注：底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合，混合液在10 min內(nèi)使用，切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效）；
? 孵育：輕輕振蕩酶標(biāo)板15 s，使孔內(nèi)液體充分混勻后，蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)10-15min；
? 終止：在反應(yīng)后的微孔中加入終止液50μL/孔，底物液由藍變黃表明終止成功。
? 讀數(shù)：終止后的酶標(biāo)板應(yīng)在5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù)，建議使用450nm、630nm雙波長讀取酶標(biāo)板吸光度值。
4. 計算結(jié)果
? 設(shè)各標(biāo)準(zhǔn)品（或樣品）的吸光度平均值為B，零標(biāo)準(zhǔn)（濃度為0 ppb的標(biāo)準(zhǔn)品）吸光度平均值B0以(B/B0)×100為各標(biāo)準(zhǔn)品（或樣品）對應(yīng)的吸光度的百分比：
? 使用半對數(shù)系統(tǒng)代入標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度的百分比，與標(biāo)準(zhǔn)品濃度擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
? 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，即可得出樣品對應(yīng)的濃度，最后乘以樣品相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中檢測物含量。
六、試劑盒參數(shù)
? 試劑盒靈敏度：0.05ppb；
? 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：0.05ppb-4.05ppb；
? 板內(nèi)變異系數(shù)：<5%；
? 板間變異系數(shù)：<15%；
? B0吸光度值：>0.8；
? 回收率：90%±30%
? 樣品檢測限：
組織、雞蛋、純牛奶………………………1 ppb
注：ppb=ng/mL或ng/g。
七、分析限制
本試劑盒為定量或半定量試劑盒，建議用于大量樣本篩查分析。若檢測結(jié)果為陽性，建議使用儀器方法開展確證實驗（如GC/MS、LC-MS/MS等）。
八、試劑盒貯存條件
? 試劑盒貯存溫度為2-8℃，切勿凍存。
? 未使用完的酶標(biāo)板須密封保存2-8℃的環(huán)境中。
九、注意事項
? 使用試劑盒前，請務(wù)必仔細(xì)閱讀說明書。
? 試劑盒使用前，需將盒內(nèi)各組份置于實驗臺上回溫至室溫（25±2℃）（提示：約1 h）。
? 試劑使用前需搖勻，混合時應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡。
? 槍頭為一次性用品，為防止試劑交叉污染，檢測過程中所用槍頭不得重復(fù)使用。
? 請勿使用過期試劑盒，不同批號試劑盒中的試劑不得混用。
? 樣品處理完畢后請立即分析，否則可能影響檢測結(jié)果。
? 底物A液、底物B液均為無色透明液體，若在使用前已變成藍色，或混合后立即變藍，說明試劑已污染或變質(zhì)。
? 加樣過程在保證精度的前提下一定要迅速，以免反應(yīng)時間差對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。
? 終止液中含有硫酸，若不小心濺上皮膚或衣物請立即用大量清水沖洗。
