1 產(chǎn)品組成
1)50X 樣本提取液(2 瓶);
2)酶試劑(2 瓶);
3)顯色劑(2 瓶);
4)底物(2 瓶);
5)說明書(1 份)。
2 試劑配制
樣本提取工作液:用純凈水以 49:1 的體積進行稀釋(即 1 份 50x 樣品提取液+49 份純凈水)。配制方法:取出附件箱中 200mL 磨口玻璃瓶,加純凈水到 200mL 刻度線,用 5mL 移液器取 4mL 50X 樣本提取液加入,搖勻貼上標(biāo)簽(標(biāo)簽內(nèi)容“農(nóng)殘樣本提取工作液”),使用后放冰箱保存,下次使用前請回溫至 20℃-30℃,溶液可反復(fù)使用。
3 樣本提取
1)蔬菜瓜果:?。?.0±0.01)g 果蔬樣品(塊莖類取(4.0±0.01)g)剪成 1cm 左右碎片,放入小燒杯中;加入 10mL 樣本提取工作液,振蕩 2min;
2)辛辣蔬菜:取(2.0±0.01)g 果蔬樣品剪成 1cm 左右碎片,放入小燒杯中;加入 10mL 樣本提取工作液,振蕩 2min 于 90℃以上水浴 10min,冷卻至室溫待測;
3)茶葉:取(1.0±0.01)g 鮮茶放入小燒杯中,加入 10mL 樣本提取工作液,靜置 2min,取出提取液,靜置 2min 待測。注:樣本提取中若浸提液混濁,或浸提液色素干擾嚴(yán)重,可用活性炭進行脫色:即將浸提液轉(zhuǎn)移至另一瓶中,加入(0.1-0.5)g 活性炭(根據(jù)顏色深淺進行調(diào)整),過濾待測。
4 測試
1)對照測試:于專用反應(yīng)瓶(或 4mL 離心管)中加入 2.5mL 樣本提取工作液,再分別加入 100μL 酶試劑,100μL 顯色劑和 100μL 底物,混勻,并立即倒入 1cm 比色皿中,按儀器“對照”鍵并清零后,放入測試通道,測試吸光度變值ΔΑ0。對照值ΔΑ0 需符合酶活性要求(注意事項 6.1)才可進行樣品的測試;
2)樣品測試:于專用反應(yīng)瓶中加入 2.5mL 待測樣品清液,再加入 100μL 酶試劑,混勻,室溫下放置10min 后,加入 100μL 顯色劑和 100μL 底物,搖勻并立即倒入 1cm 比色皿中,于儀器選中“樣品種類”,放入測試通道,測試吸光度變化值ΔΑt。
5 結(jié)果判定
1)以分光光度計測試時,按以下表達式計算出抑制率:抑制率(%)=[(ΔΑ0-ΔΑt)/ΔΑ0]×99%;樣品的抑制率在 40%~50%之間為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品,抑制率大于 50%為農(nóng)殘超標(biāo)樣品,表明被測樣品的農(nóng)藥殘留可能超過安全的界定標(biāo)準(zhǔn),建議用氣相色譜等作進一步分析確認(rèn);
2)以農(nóng)殘檢測儀,多功能儀檢測時其抑制率一般可自動計算。樣品的抑制率在 40%-50%之間為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品,抑制率大于 50%為農(nóng)殘超標(biāo)樣品,表明被測樣品的農(nóng)藥殘留可能超過安全的界定標(biāo)準(zhǔn),建議用氣相色譜等作進一步分析確認(rèn)。
6 注意事項
1)酶活性要求:參照 GB/T 5009.199-2003,1min 內(nèi)的對照值(ΔΑ0)在 0.15-0.3 之間;3min 內(nèi)的對照值(ΔΑ0)應(yīng)大于 0.3;
2)保存:試劑盒應(yīng)保存 4℃冰箱,保質(zhì)期 12 個月;
3)使用:任何試劑使用時,用一瓶打開一瓶,用完后才使用新的,防止變質(zhì);
4)器具專用原則:任何用于移液的器具和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽,單獨使用,以免交叉污染;5)試劑只出不入原則:測試時,從任何試劑瓶吸出的試劑,禁止再次注射回試劑瓶;
6)常溫測試:試劑盒使用之前,所有試劑應(yīng)恢復(fù)到室溫,當(dāng)環(huán)境溫度過低時(一般低于 20℃),測試時需作必要保溫措施。