下自旋肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白測(cè)定工具包提供了G -或f -肌動(dòng)蛋白+正(α-actinin)和負(fù)(牛血清白蛋白,BSA)綁定控制蛋白質(zhì)。當(dāng)肌動(dòng)蛋白的任何位點(diǎn)都有親和力時(shí),就會(huì)發(fā)生肌動(dòng)蛋白結(jié)合。F-actin結(jié)合可以用自旋下降法測(cè)量。用這種方法離心分離f -肌動(dòng)蛋白和g -肌動(dòng)蛋白。F-actin結(jié)合蛋白與肌動(dòng)蛋白絲共同沉積,在離心管底部形成顆粒。可以檢測(cè)到具有F-actin捆綁活性的蛋白,因?yàn)樗鼈儠?huì)導(dǎo)致F-actin在低于正常離心力的情況下沉淀(14000 x g vs 150000 x g)。
F-actin切斷蛋白、g -actin結(jié)合蛋白或非actin結(jié)合蛋白會(huì)留在上清液中。如果G-actin在上清液中的殘留量比在陰性對(duì)照樣品中更多,則需要對(duì)蛋白進(jìn)行分離,在添加測(cè)試蛋白前后,通過(guò)測(cè)量F-actin的長(zhǎng)度分布來(lái)進(jìn)一步測(cè)試這種活性。
G-actin結(jié)合蛋白可以通過(guò)在G-actin中加入測(cè)試蛋白并誘導(dǎo)聚合來(lái)檢測(cè),如果測(cè)試蛋白將G-actin隔離,那么自旋向下測(cè)試時(shí),與對(duì)照相比,更多的actin會(huì)留在上清液中。
肌動(dòng)蛋白有兩種形式:球狀亞基(G-actin)和絲狀聚合物(F-actin)(有關(guān)肌動(dòng)蛋白的更多信息,請(qǐng)參閱About Actin頁(yè)面)。這兩種形式的肌動(dòng)蛋白都與細(xì)胞中過(guò)多的蛋白質(zhì)相互作用。到目前為止,有超過(guò)50種不同種類(lèi)的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABPs),而且?guī)齑孢€遠(yuǎn)未完成。
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白使肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架對(duì)細(xì)胞和細(xì)胞外信號(hào)作出快速反應(yīng),并在細(xì)胞骨架參與許多細(xì)胞過(guò)程中起著*的作用。這些包括細(xì)胞形狀和運(yùn)動(dòng),肌肉收縮,細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸,細(xì)胞發(fā)病機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。本試劑盒含有非肌動(dòng)蛋白(Cat)。# APHL99)。同樣的試劑盒也可用于骨骼肌肌動(dòng)蛋白(Cat)。(AKL99),見(jiàn)Cat。# BK001。骨骼肌肌動(dòng)蛋白自旋試劑盒可能更適合用于研究肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白從肌肉組織。
充分了解如何在軸突再生中對(duì)MT和F-actin細(xì)胞骨架進(jìn)行動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié),對(duì)于解決成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)中受損軸突的再生的謎題至關(guān)重要。根據(jù)目前的研究,MTs和F-actin在成人CNS軸突再生中的作用至少有3條:
1. 增強(qiáng)受損神經(jīng)元的內(nèi)在再生能力;
2. 為損傷相關(guān)分子和細(xì)胞器的順行和逆行運(yùn)輸提供軌道;
3. 調(diào)節(jié)參與纖維蛋白合成的分子的釋放1。