QIAGEN凱杰Ni-NTA Agarose幾大特點(diǎn)
利用重力流層析純化His-tagged蛋白
- 一步純化就可從細(xì)胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
- 高親和力和高結(jié)合能力
- 可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
- 預(yù)先加載的即用型基質(zhì)適合任何規(guī)模的蛋白純化
- 提供自動(dòng)純化和檢測(cè)的方法
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì)，用于純化帶有His標(biāo)簽的重組蛋白。His標(biāo)簽上的*殘基能高特異性的結(jié)合到固定的鎳離子上。細(xì)胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上，His-tagged蛋白結(jié)合，其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
QIAGEN凱杰Ni-NTA Agarose幾大特點(diǎn)
在天然條件下一步純化蛋白。
在天然條件下純化蛋白。人血清應(yīng)答因子（SRF）在帶有牛痘病毒載體的HeLa細(xì)胞中表達(dá)，使用Ni-NTA Agarose以及在洗滌和洗脫步驟中不同濃度的咪唑純化。銀染法使得蛋白可見。CL：細(xì)胞裂解物；FT：流過部分；W1: 0.8 mM洗滌液；W2 & W3: 8 mM 洗滌液；W4 & W5: 40 mM 洗滌液；E1 & E2: 80 mM 洗脫液。（數(shù)據(jù)由德國H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。）
Performance
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián)，具有強(qiáng)結(jié)合能力，非特異性結(jié)合少（參見"One-step purification under native conditions"）。這種材料對(duì)于多數(shù)的生產(chǎn)規(guī)模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨(dú)訂購，也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達(dá)和純化的完整試劑盒。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA（氨基三乙酸鎳）樹脂，對(duì)含有6個(gè)或以上*殘基（連續(xù)或交替）親合標(biāo)簽的蛋白選擇能力強(qiáng)。該技術(shù)可在天然或變性條件下，從所有表達(dá)體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個(gè)鎳離子螯合位點(diǎn)，與鎳的結(jié)合能力比其他僅有三個(gè)金屬螯合位點(diǎn)的金屬螯合純化方法的結(jié)合能力強(qiáng)。多出的一個(gè)螯合位點(diǎn)可防止鎳離子脫落，因此具有更強(qiáng)的結(jié)合能力，蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌等各種表達(dá)體系中純化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的純化包括四個(gè)步驟：裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫（參見Protein purification with the Ni-NTA protein purification system）。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結(jié)構(gòu)或6xHis標(biāo)簽。因此可實(shí)現(xiàn)在天然或變性條件下，從稀釋溶液或細(xì)胞裂解液中一步純化蛋白。可使用強(qiáng)變性劑和洗滌劑高效溶解和純化受體、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結(jié)合產(chǎn)物的試劑（見表）。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競(jìng)爭(zhēng)性洗脫試劑或降低pH值，可洗脫得到純化蛋白。
