1、原理及適用范圍
阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii )存在于腸道中,在一定條件下可引起人和動物致病。能引起新生兒腦膜炎、致死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等疾病,且伴隨有嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥、發(fā)育障礙等癥狀,引起的死亡率高達50%以上。新生兒阪崎腸桿菌感染與嬰兒配方奶粉密切相關(guān),奶粉中微量的阪崎腸桿菌污染也能導(dǎo)致感染的發(fā)生。 阪崎腸桿菌測試片(FilmplateTM Enterobacter sakazaiiBQ208)是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,由阪崎腸桿菌選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異性酶顯色劑等組成,簡化了檢測程序,更加適合各級檢驗部門和食品生產(chǎn)企業(yè)使用。本產(chǎn)品適用于奶粉、牛奶及奶制品的快速檢測。參照標準:食品安全國家標準 食品微生物檢驗坂崎腸桿菌檢驗(GB/T4789.40-2010)。
2、操作方法
2.1、樣品處理:取樣品100mL(g),加入已預(yù)熱至44℃裝有900mL增菌液的錐形瓶中,用手緩緩地搖動至充分溶解,44℃±0.5℃,增菌培養(yǎng)6-8h。
2.2、接種:將阪崎腸桿菌測試片(BQ208)置于平坦實驗臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL經(jīng)過增菌的樣品液,慢慢均勻地滴加到*濾紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s使培養(yǎng)基凝固,每個樣品接種兩片。做一片空白陰性對照。
2.3、培養(yǎng):將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h。
3、結(jié)果判讀
對測試片進行觀察,呈藍綠色的菌落為阪崎腸桿菌,為陽性結(jié)果;無任何點為陰性結(jié)果。出現(xiàn)陽性菌落的樣本,用其他更為可靠的方法進行驗證,沒有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗一次。
4、結(jié)果報告
在100mL(或100g )樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。
5、附加說明
5.1、經(jīng)過試驗,測試片具有很好的特異性,接種阪崎腸桿菌純菌株產(chǎn)生典型的藍綠色點,接種一些腸道菌如大腸桿菌、腸炎沙門氏菌等時,一加樣下去就會出現(xiàn)有紫色的點或暈狀,此為產(chǎn)品本身顯色劑的原因,不影響產(chǎn)品的使用和結(jié)果判讀;而*、大腸桿菌O157和副溶血弧菌等均被抑制。
5.2、多次試驗結(jié)果對純菌的zui低檢測限為4cfu/mL,與平皿法的符合率均在80%以上。
5.3、增菌液的配制和滅菌:取一包*粉,倒入1000mL的三角錐瓶中,加入900mL純凈水,加塞后加熱至沸,保持20分鐘,冷卻后當天使用。有條件可采用115℃高壓滅菌15min。
5.4、注意使用過的測試片上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。