根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度A值與其中溶質濃度C以及光徑L成正比，即A＝aCL（a為該物質的吸光系數(shù)）。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光值可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下的吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素提取液中葉綠素a、b含量，只需測定該提取液在2 個特定波長下的吸光度度值，并根據(jù)葉綠素a與b在該波長下的吸光系數(shù)即可求出各自的濃度。在測定葉綠素a、b含量時，為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長應選擇葉綠素在紅光區(qū)的大吸收峰。
手持葉綠素儀已知葉綠素a、b的80 ％丙酮提取液在紅光區(qū)的大吸收峰分別為663nm 和645nm，又知在波長663nm下，葉綠素a、b在該溶液中的比吸收系數(shù)分別為82.04 和9.27，在波長645nm下分別為16.75和45.60，可根據(jù)加和性原則列出以下關系式：
A663=82.04Ca +9.27Cb………………（1）
A645=16.75Ca+45.6Cb………………（2）
式中A663、A664分別為波長663nm和645nm處測定葉綠素溶液的吸光度值；Ca、Cb分別為葉綠素a、b的濃度（g/L）。
解聯(lián)立方程（1）、（2）可得以下方程：
Ca=0.0127A663-0.00269A645…………（3）
Cb=0.0229A645-0.00468A663…………（4）
如把葉綠素含量單位由g/L改為mg/L，（3）、（4）式則可改寫為：
Ca（mg/L）=12.7A663-2.69A645…………（5）
Cb（mg/L）=22.9A645-4.68A663…………（6）
葉綠素總量CT（mg/L）=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……（7）
葉綠素總量也可根據(jù)下式求導
A652=34.5×CT
由于652nm為葉綠素a與b在紅光區(qū)吸收光譜曲線的交叉點（等吸收點），兩者有相同的比吸收系數(shù)（均為 34.5 ），因此也可以在此波長下測定一次吸光度（A652）求出葉綠素總量：
CT（g/L）=A652/34.5
CT（mg/L）=A652×1000/34.5………（8）
因此，可利用（5）、（6）式可分別計算葉綠素a與b含量，利用（7）式或（8）式可計算葉綠素總量，對比葉綠素檢測儀測量出來的結果。
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