黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫測試盒
本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定谷物中AFB1。該測試盒反應孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標儀。
1 概要
黃曲霉毒素是由曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，主要污染玉米、花生、堅果等。天然污染的黃曲霉毒素以AFB1為主，AFB1屬于強烈致癌物質(zhì)，肝臟是其主要的靶器官，具有*的急性毒性和致癌性。
AFB1檢測方法主要有薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）和ELISA方法，本試劑盒是以應用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測方法，可以準確快速檢測糧谷類和花生及飼料中的AFB1。
2 測定原理
本試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入AFB1標準品或樣品、抗AFB1單克隆抗體進行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經(jīng)過終止液終止后，用酶標儀在450nm處測定OD值。
3 提供的物品
----微孔板…………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA
----5個濃度的AFB1標準溶液（各0.5mL）
標準1：0ng/mL…………………………………………………………….直接使用
標準2：0.1ng/m…………………………………………………………….直接使用
標準3：0.2ng/mL ………………………………………………………….直接使用
標準4：0.5ng/m………………………………………………….…………直接使用
標準5：1.0ng/m………………………………………….…………………直接使用
----抗AF B1單克隆抗體溶液（6mL）……………………………………………直接使用
----酶標物（12mL）..………………………………………………………………直接使用
----顯色液（12mL）..………………………………………………………………直接使用
----終止液（6mL）…………………………………………………………………直接使用
----濃縮洗液（30mL）..……………………………………………………………稀釋使用
4 盒中未提供，需自備物品
----微孔板酶標儀（可于450nm處測定）、振蕩器、粉碎機、微量移液器
----量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙
----氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、去離子水或蒸餾水
5 操作者注意事項
----標準溶液中含有黃曲霉毒素，應特別小心。
----使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液（10%v/v）浸泡過夜。
----終止液含有，避免接觸皮膚。
----每次加樣后立即將所有試劑放回2~8℃。
----每步加樣時間應控制在5min內(nèi)。
----孵育過程中應避光。
----不要使用過期試劑盒。
----不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。
6 儲存條件
----保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍.
----顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
----將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。
7 試劑變質(zhì)的標志
----標準1的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8 樣品處理
----樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存。
----取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70%甲醇-水溶液。
----強力振蕩3分鐘。
----用快速定性濾紙過濾。
----取1mL濾液，加水4mL進行稀釋。
----取50μL稀釋液進行分析。
----*根據(jù)需要可以增減樣品量，但甲醇-水溶液的量也應相應增減。
9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
----取所需數(shù)量的板條插入微孔架，用洗液洗滌微孔板3min×2次。
----加入50mL標準品或處理好的樣品到微孔，記錄樣品及標準的位置，每個標準和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL抗體溶液到每個微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入酶標物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗滌微孔板3min×5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL（2滴），37℃孵育10~12min。
----每孔加入終止液50mL（1滴），立即用酶標儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。
注：在定量分析中，顯色液和終止液需要用移液器準確量取。
10 樣品濃度計算
以標準溶液OD值與標準1OD值的比值為縱坐標，所對應標準溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標，制作標準曲線。根據(jù)樣品OD值與標準1OD的比值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為AFB1濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中AFB1濃度C（ng/mL），按下列公式計算出樣品中AFB1含量：
AFB1含量（mg/kg）= C×K
式中：C：稀釋后樣品提取液中AFB1含量（ng/mL）
K：樣品稀釋倍數(shù)（按照本說明書中樣品處理程序方法為25）
11試劑盒主要技術(shù)指標及參數(shù)
測試盒zui低檢出濃度0.1ng/mL，回收率70%~120%，與AFB2的交叉反應系數(shù)小于1%，與AFG1的交叉反應系數(shù)為4.65%，與AFG2交叉反應系數(shù)小于1%。試劑盒校正曲線的線性范圍0.1~1.0ng/mL，試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。
：李菲 :
