黃曲霉毒素B1速測(cè)卡使用說(shuō)明書(shū)
方法編號(hào)：CDC-5512
1.適用范圍與檢測(cè)意義：本品適用于谷物、飼料、食用油、調(diào)料和發(fā)酵酒等物質(zhì)中黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1簡(jiǎn)寫(xiě)為AFB1）的快速檢測(cè)。黃曲霉毒素B1是目前已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性很強(qiáng)的一種，對(duì)人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。
2.測(cè)定原理：本品采用高度特異性抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過(guò)單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合AFB1-BSA偶聯(lián)物和樣品中可能含有的AFB1的原理。試劑含有被事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1單克隆抗體。檢出限為5ng/ml。
3.所用器皿：常量天平±0.1g；蒸發(fā)皿或燒杯；量筒；滴管；移液管；小型粉碎機(jī)；離心機(jī)等。
4.樣品制備
4.1谷物與飼料：取5g以上有代表性樣品并充分粉碎，準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0g均勻試樣于15ml離心管中，向離心管中準(zhǔn)確加入2ml純凈水和8.0ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，4000rpm離心1分鐘，將上清液用吸管吸出2.0ml到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干液體，根據(jù)不同樣品對(duì)黃曲霉毒素B1（AFB1）的*要求不同，參考下表將不同體積的稀釋液加入到已吹干的杯子中，用吸管反復(fù)沖洗杯底和杯壁，使殘?jiān)?溶解，此溶解液即為樣品檢測(cè)液。
谷物中AFB1*（ppb） | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 100 |
使用稀釋液體積（ml） | ０.４ | ０.８ | １.６ | ２.４ | ３.２ | ４ | ８ |
稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） | 8 | 16 | 32 | 48 | 64 | 80 | 160 |
4.2食用油：稱(chēng)取2.0g油樣于小燒杯中，用8ml正己烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，準(zhǔn)確加入4ml純凈水充分振蕩3min,吸去上層正己烷層,再加入4ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，靜置或離心得上清液，將上清液吸出2ml到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干，參照表格，根據(jù)AFB1*，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。此溶解液即為檢測(cè)液。
食用油中AFB1*（ppb） | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 100 |
使用稀釋液體積（ml） | 0.6 | 1.2 | 2.4 | 3.6 | 4.8 | 6.0 | 12.0 |
稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） | 12 | 24 | 48 | 72 | 96 | 120 | 240 |
4.3醬油、醋：準(zhǔn)確量取2.0ml樣品于15ml離心管中，準(zhǔn)確加入4.0ml乙酸乙脂，塞緊瓶塞后充分震蕩5min，靜置1~2min，待溶液分層以后將上清夜用移液槍?zhuān)ɑ蛞埔汗?，吸管）全部轉(zhuǎn)移到另一只15ml離心管中，加入2.0ml 0.05M Na2CO3溶液，充分震蕩3min，用吸管取2mL上清液到小玻璃杯中，吹干濾液，參照表格，根據(jù)AFB1*，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。此溶解液即為檢測(cè)液。
醬油、醋中AFB1*（ppb） | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 100 |
使用稀釋液體積（ml） | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 10 | 20 |
稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） | 20 | 40 | 80 | 120 | 160 | 200 | 400 |
4.3發(fā)酵酒：準(zhǔn)確量取2.0ml樣品于15ml離心管中，準(zhǔn)確加入4.0ml乙酸乙脂，塞緊瓶塞后充分震蕩5min，靜置1~2min，待溶液分層以后用吸管取2mL上清液到小玻璃杯中，吹干濾液，參照食用油樣品制備表格，根據(jù)AFB1*，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。此溶解液即為檢測(cè)液。
5測(cè)定
5.1 使用前將試紙卡和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。
5.2 從原包裝袋中取出試紙卡，打開(kāi)后平放在桌面上，在1小時(shí)內(nèi)盡快地使用。
5.3 用滴管吸取待檢樣品溶液，滴加3滴于加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)。
5.4 結(jié)果應(yīng)在5min時(shí)讀取，超過(guò)10min的時(shí)間判讀無(wú)效。
6結(jié)果判定
6.1陽(yáng)性：C線(xiàn)顯色，T線(xiàn)不顯色，判為陽(yáng)性。
6.2陰性：C線(xiàn)顯色，T線(xiàn)肉眼可見(jiàn)，無(wú)論顏色深淺均判為陰性。
6.3無(wú)效：C線(xiàn)不顯色，無(wú)論T線(xiàn)是否顯色，該試紙均判為無(wú)效。
7說(shuō)明
7.1本品為一次性產(chǎn)品，勿重復(fù)使用。
7.2如遇稀釋液不足，可用蒸餾水加入稀釋液中混勻后使用。
7.3本品為篩選方法，任何陽(yáng)性結(jié)果請(qǐng)用其它方法作進(jìn)一步確認(rèn)。
7.4有條件的實(shí)驗(yàn)室可以用AFB1標(biāo)準(zhǔn)品作為判斷參考。
7.5本品應(yīng)保存在干燥陰涼處（4-30℃），有效期18個(gè)月。
8包裝：試紙卡5片，稀釋液1瓶，15ml離心管1支。
